Enzima que usa água para quebrar uma ligação química, o que geralmente resulta na divisão de uma molécula maior em moléculas menores. Alguns exemplos comuns de enzimas hidrolase são as esterases, que incluem lipases, fosfatases, glicosidases, peptidases e nucleosidases.

Cataliza as reações de despolimerização, ou seja, a hidrólise de macromoléculas (quitina, proteínas, peptidoglicanos) em suas unidades monoméricas ou oligoméricas, que os microrganismos do solo podem transportar para seu citoplasma por meio de permeases específicas.

As hidrolases são classificadas como EC 3 na classificação enzimática do número EC. As hidrolases também podem ser classificadas em várias subclasses, de acordo com as ligações em que atuam, por exemplo, EC 3.1: ligações ésteres (esterases: nucleases, fosfodiesterases, lipases, fosfatases); EC 3.2: açúcares (DNA glicosilases, glicosídeo hidrolase).